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                ACEA Quanteon流式细胞仪在检测循环肿瘤细規矩胞▲CTCs上的应用
                点击次数:313 发布日期:2019-1-25  来源:本站 仅供参考,谢绝转载,否则责都聽習慣了任自负
                 
                 

                循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cells, CTCs)是指自发或因诊疗操作自实体肿瘤原发灶或转移灶 他脱落进入外周血循环的肿々瘤细胞,是肿你臣服了瘤复发和发生远端转移的关键因素。CTCs检测有王老助于恶性肿瘤的早期诊断、疗效监测、预后判断、耐药性评估等,其临床应用价☆值已被广泛认可【1,2】由于CTCs的稀有性,流大吼一聲式细胞术鉴定CTCs需有较高灵敏度。

                 

                 

                 

                实验设计

                 

                CTCs在患者血液中的含量不像離火之晶那般狂暴非常稀少,大约每106~107个白细胞中不由大聲吼道仅1个至几个CTCs存在,灵敏度一直是其检测及应用的主要障碍。在众多文献报道中,人们常利用肿瘤细胞掺除非是仙帝入试验评价CTCs检测方法/系统的灵√敏度、特异性、准确性、重复人都大氣不敢喘性等指标。


                本研究选用高表达EpCAM的结肠而且速度恐怖癌细胞株(SW620)作为掺入★细胞(图1),第一部分将不同数量實力根本不是我(0~256个)SW620细胞ξ掺入到1×106个正常人PBMCs中,用ACEA Quanteon流式细胞仪检测SW620细胞的实际个澹臺洪烈搖了搖頭数,确定仪器检测潛力絕對比我預測CTCs的灵敏度。


                一、SW620细胞表面EpCAM表达鉴定

                 

                图1. SW620细胞表面EpCAM表达鉴定。将新鲜血(2mL)或掺有SW620细胞ζ 的新鲜血(1000个/2mL)用Ficoll-Paque PLUS淋巴细胞分鐵鏈就化為一條長繩直接朝圍繞了過來离液(GE healthcare,17-1440-02)分离PBMCs后,在以上样本以及单独SW620细胞中分别加入Ψ抗CD45-FITC和抗EpCAM-APC抗体孵育,设ζ同型抗体对照,在ACEA Quanteon流式细胞仪砰上测试,数据采用相同设▓门策略分析。a. SW620细胞用IgG1 FITC和IgG2b APC同型抗体染色的结臉我就興奮啊醉無情哈哈大笑果; b-d. SW620细胞、新鲜血和掺有SW620的新←鲜血用CD45-FITC和EpCAM-APC抗体染色的结果。


                二、ACEA Quanteon可检测到106个正←常人白细胞中的1个肿瘤细定心丸胞

                 


                 

                图2. 灵敏度分析。收集对数生长期身上冒出一陣陣青色光芒的SW620细胞,标记 EpCAM-APC荧光抗体,设同型抗一切体对照,冰上孵育60min,用含0.5%BSA的D-PBS洗两遍;将染色珠子被她們吸入體內后的SW620细胞按0,2,4,8,16,32,64,128,256,512个(体积20μL)分别掺入2×106个PBMCs(体积180μL)中,涡旋混匀(理论上,每100μL中含SW620细胞数:0,1,2,4,8,16,32,64,128,256),在ACEA Quanteon流式细胞仪上中∞速采集100μL,记录EpCAM+细胞数量。A. 设门策略。FSC-SSC散点图上设P1门去除碎片和杂信号,基于P1门,在散点图他只能放棄圍攻傲光上表现为EpCAM+的细胞即』为掺入的SW620细胞;B. ACEA Quanteon流式我细胞仪上的测试结果;

                 

                结论
                ACEA Quanteon流式细胞仪差距检测结果显示,在不同细※胞数量掺入水平,实际检出细胞︾数量与理论数量之间呈现 嗡良好的线性关系,灵敏度为0.0001%,即∏可检测到106个正常人白细胞若是被抓破傷口中的1个肿瘤细胞,证明ACEA Quanteon流式细胞仪在检测CTCs方面具有高灵敏度。

                参考文献

                [1] 循环肿瘤细胞检测与临床氣勢從他身后爆發而出应用进展。赵倩雯,司徒博,郑 磊。南方医科大学学报, 2017, 37(10): 1423-1426

                [2] 循环肿瘤威壓细胞的研究进展。王宜文,胡孔旺。安徽医科大学学报,2017,52(12):1897-1900

                 

                *文章来〓自艾森生物

                 

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